高速冷冻离心机在基因提取中的应用

　　乙醇被*为是一种可以替代汽油的液体燃料，也是很好的燃油品质改善剂，甘蔗可以生成乙醇燃料。为提高甘蔗发酵效率，可提取酿酒酵母a288c基因组，克隆INO1基因，在工业酿酒酵母中过表达，提高菌种耐乙醇能力，提高细胞活力。下面简单介绍下提取和扩增过程。

　　酿酒酵母基因组提取

　　原始酿酒酵母菌株s288c活化后，使用YPD固体培养基进行平皿划线分离得到酿酒酵母菌株s288c单菌落，牙签挑取单菌落接至50ml YPD液体培养基进行30 ℃摇瓶培养24-30 h，用高速冷冻离心机去上清（采用高速冷冻离心机保护样本生物活性）；按照酿酒酵母基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA。

　　INO1基因序列扩增

　　以酿酒酵母S288C基因组DNA为模板进行PCR扩增。反应条件如下：预变性94℃ 5 min，变性94℃30s，退火54℃ 30s,延伸72℃ 97s，30个循环，延长72℃。10min保存4℃。反应结束后取2 uL PCR扩增产物于1％琼脂糖凝胶电泳进行检测。采用胶回收试剂盒进行胶回收。

　　回收后的PC产物进行连接、转化和菌液PCR检测，z后进行质粒提取和测序。