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高速冷冻离心机在基因提取中的应用

发布时间:2016-11-09   点击次数:650次
   高速冷冻离心机在基因提取中的应用
  乙醇被公认为是一种可以替代汽油的液体燃料,也是很好的燃油品质改善剂,甘蔗可以生成乙醇燃料。为提高甘蔗发酵效率,可提取酿酒酵母a288c基因组,克隆INO1基因,在工业酿酒酵母中过表达,提高菌种耐乙醇能力,提高细胞活力。下面简单介绍下提取和扩增过程。
  酿酒酵母基因组提取
  原始酿酒酵母菌株s288c活化后,使用YPD固体培养基进行平皿划线分离得到酿酒酵母菌株s288c单菌落,牙签挑取单菌落接至50ml YPD液体培养基进行30 ℃摇瓶培养24-30 h,用高速冷冻离心机去上清(采用高速冷冻离心机保护样本生物活性);按照酿酒酵母基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA。
  INO1基因序列扩增
  以酿酒酵母S288C基因组DNA为模板进行PCR扩增。反应条件如下:预变性94℃ 5 min,变性94℃30s,退火54℃ 30s,延伸72℃ 97s,30个循环,延长72℃。10min保存4℃。反应结束后取2 uL PCR扩增产物于1%琼脂糖凝胶电泳进行检测。采用胶回收试剂盒进行胶回收。
  回收后的PC产物进行连接、转化和菌液PCR检测,z后进行质粒提取和测序。

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